Kokoro Nucleic Acid Wiwa

Awọn ilana jiini ti ọpọlọpọ awọn ọlọjẹ ni a ti mọ.Awọn iwadii acid Nucleic eyiti o jẹ awọn apakan kukuru ti DNA ti a ṣe apẹrẹ lati ṣe arabara pẹlu DNA gbogun ti ibaramu tabi awọn apakan RNA.Iṣeduro pq polymerase (PCR) jẹ ilana ti o munadoko diẹ sii fun wiwa ọlọjẹ.Awọn ọna iwadii ti iṣelọpọ giga ti ni idagbasoke laipẹ.

A. Nucleic acid hybridization ilana

Nucleic acid hybridization, nipataki pẹlu Southern blotting (Gusu) ati Northern blotting (Ariwa), ni a sare sese titun ilana ni awọn kokoro aisan aaye.Idiyewo ti arabara ni lati lo awọn abala kukuru ti DNA (ti a npe ni “iwadii”) ti a ṣe lati ṣe arabara pẹlu DNA gbogun ti ibaramu tabi awọn apakan RNA.Nipa alapapo tabi itọju ipilẹ, DNA ibi-afẹde-meji tabi RNA ti yapa si awọn okun ẹyọkan ati lẹhinna jẹ aibikita lori atilẹyin to muna.Lẹhin iyẹn, a ti ṣafikun iwadii ati ṣe arabara pẹlu DNA tabi RNA ibi-afẹde.Bi a ti ṣe aami iwadii pẹlu isotope tabi nuclide ti kii ṣe ipanilara, DNA tabi RNA ti o fojusi le ṣee wa-ri nipasẹ adaṣe adaṣe tabi nipasẹ eto biotin-avidin.Níwọ̀n bí ó ti jẹ́ pé ọ̀pọ̀ jù lọ àwọn ẹ̀yà apilẹ̀ àbùdá agbógunti-ńlá ti jẹ́ cloned àti títẹ̀léra, a lè ṣàwárí wọn nípa lílo ọ̀rọ̀-ọ̀wọ́-ọ̀wọ́-ọ̀rọ̀-ọ̀rọ̀-ọ̀wọ́-ọ̀wọ́-ọ̀rọ̀ bí àwọn ìwádìí nínú àpẹrẹ.Lọwọlọwọ, awọn ọna arabara pẹlu: dot blot , ni situ arabara ninu awọn sẹẹli , DNA blotting (DNA) (Southern blot) ati RNA blotting (RNA) (Northern blot).

B.PCR ọna ẹrọ

Ni awọn ọdun aipẹ, lẹsẹsẹ awọn ilana imudara imudara acid nucleic acid ti ni idagbasoke ti o da lori PCR, lati ṣe idanwo awọn ọlọjẹ aibikita tabi ti ko gbin.PCR jẹ ọna ti o le ṣajọpọ ọkọọkan DNA kan pato nipasẹ iṣesi in vitro polymerase.Awọn ilana ti PCR pẹlu kan gbona ọmọ ti mẹta awọn igbesẹ ti: denaturation , annealing , ati itẹsiwaju Ni ga otutu (93 ℃ ~ 95 ℃), awọn ni ilopo-stranded DNA ti wa ni niya si meji nikan DNA strands;lẹhinna ni iwọn otutu kekere (37 ℃ ~ 60 ℃), awọn alakoko nucleotide meji ti a ṣepọ pọ si awọn abala DNA ti o ni ibamu;lakoko ti o wa ni iwọn otutu ti o yẹ fun enzymu Taq (72℃), iṣelọpọ ti awọn ẹwọn DNA tuntun bẹrẹ lati alakoko 3'end nipa lilo DNA ibaramu gẹgẹbi awọn awoṣe ati awọn nucleotides ẹyọkan bi awọn ohun elo.Nitorinaa lẹhin iyipo kọọkan, ẹwọn DNA kan le pọ si awọn ẹwọn meji.Titun ilana yii ṣe, ẹwọn DNA kọọkan ti a ṣepọ ni ọna kan le ṣee lo bi awoṣe ni ọna atẹle, ati pe nọmba awọn ẹwọn DNA jẹ ilọpo meji ni ọna kọọkan, eyiti o tumọ si iṣelọpọ PCR ti pọ si ni iyara log 2n.Lẹhin awọn akoko 25 si 30, iṣelọpọ PCR jẹ idanimọ nipasẹ electrophoresis, ati pe awọn ọja DNA kan pato le ṣe akiyesi labẹ ina UV (254nm).Fun anfani rẹ ti pato, ifamọ, ati irọrun, PCR ti gba ni iwadii ile-iwosan ti ọpọlọpọ awọn akoran ọlọjẹ bii HCV, HIV, CMV, ati HPV.Bi PCR ṣe ni itara pupọ, o le rii DNA ọlọjẹ ni ipele fg, iṣẹ naa yẹ ki o ṣe ni iṣọra pupọ lati yago fun rere eke.Ni afikun, abajade rere ni idanwo nucleic acid ko tumọ si pe ọlọjẹ ajakalẹ wa laaye ninu apẹẹrẹ.

Pẹlu ohun elo jakejado ti ilana PCR, awọn imuposi ati awọn ọna tuntun ti ni idagbasoke ti o da lori ilana PCR fun idi idanwo oriṣiriṣi.Fun apẹẹrẹ, akoko gidi pipo PCR le rii ẹru gbogun ti;ni ipo PCR ni a lo lati ṣe idanimọ ikolu kokoro ni àsopọ tabi awọn sẹẹli;PCR ti o ni itẹ-ẹiyẹ le pọ si pato ti PCR.Lara wọn, PCR akoko gidi ti ni idagbasoke ni iyara diẹ sii.Ọpọlọpọ awọn imọ-ẹrọ tuntun, gẹgẹbi TaqMan hydrolysis iwadii, iwadii arabara, ati iwadii beacon molikula, ti ni idapo sinu ilana pipo PCR akoko gidi, eyiti o jẹ lilo pupọ ni iwadii ile-iwosan.Yato si idamo ẹru gbogun ti inu omi ara awọn alaisan ni deede, ọna yii tun le ṣee lo lati ṣe awari ẹda ti o ni ifarada oogun.Nitorinaa, PCR pipo akoko gidi ni a lo ni pataki ni igbelewọn ipa alumoni ati iwo-kakiri ifarada oogun.

C. Wiwa ti o ga julọ ti awọn acids nucleic viral

Lati pade awọn iwulo fun iwadii iyara ti awọn arun ajakalẹ-arun tuntun, ọpọlọpọ awọn ọna wiwa-giga, bii awọn eerun DNA (DNA), ti fi idi mulẹ.Fun awọn eerun DNA, awọn iwadii kan pato jẹ iṣelọpọ ati somọ awọn eerun ohun alumọni kekere ni iwuwo giga pupọ lati ṣe agbekalẹ microarray DNA (DNA) eyiti o le ṣe arabara pẹlu apẹẹrẹ.Ifihan agbara ti arabara le jẹ aworan nipasẹ maikirosikopu confocal tabi scanner laser ati ni ilọsiwaju siwaju nipasẹ kọnputa ati ṣeto data nla nipa awọn oriṣiriṣi oriṣiriṣi le ṣee gba.Awọn iru meji ti chirún DNA lo wa."Erún kolaginni" jẹ bi atẹle: awọn oligonucleotides pato ti wa ni iṣelọpọ taara lori awọn eerun igi.Omiiran ni DNA pool ërún.Awọn jiini ti cloned tabi awọn ọja PCR ti wa ni titẹ lẹsẹsẹ lori ifaworanhan.Anfani ti imọ-ẹrọ chirún DNA jẹ wiwa nigbakanna ti opoiye nla ti awọn ilana DNA.Ẹya tuntun ti ërún wiwa pathogen le ṣe idanimọ diẹ sii ju awọn ọlọjẹ eniyan 1700 ni ẹẹkan.Imọ-ẹrọ chirún DNA yanju awọn iṣoro ti awọn ọna arabara acid nucleic ibile ati pe o ni awọn ohun elo gbooro pupọ ni iwadii gbogun ti ati iwadii ajakale-arun.